毒理学杂志

苯-甲苯-二甲苯混合暴露的联合毒作用特征及肾上皮-间质细胞共培养模型的构建与验证

目的 阐明苯、甲苯与二甲苯(benzene,toluene,and xylene,BTX)混合染毒对肾小管上皮细胞的联合作用模式，构建并验证肾上皮-间质共培养体外模型，为肾毒性机制研究提供可用平台。方法 采用CCK-8法在HK-2细胞中检测不同浓度苯(3～8 mg/ml)、甲苯(0.4～1.4 mg/ml)、二甲苯(0.05～1.6 mg/ml)单独染毒24 h时的细胞存活情况，并评估BTX固定体积比(1∶1∶1)混合物的剂量-反应，采用Compu Syn计算联合指数(CI)判定作用类型。建立HK-2/HFF-1跨膜共培养模型，设置代表性混合剂量(0.8、1.0和1.2 mg/ml)与时间点(8、16和24 h)，比较单/共培养在细胞活力、细胞周期、炎症因子(IL-6、IL-8和TNF-α)及肾损伤标志物(KIM-1、OPN、CLU和Cys-c)、肝细胞生长因子HGF上的差异。结果 在IC₁₀～IC₈₀区间，BTX混合物总体呈拮抗作用(CI>1)，且随剂量升高拮抗增强;至IC₉₀附近接近相加作用(CI≈1)。共培养条件下，8 h时HK-2活力高于单培养组，16～24 h差异无统计学意义。共培养组上清IL-6[各剂量组，培养方式主效应:F(1,16)=1 162.11,P<0.05]、IL-8(各剂量组，P<0.05)、TNF-α(在1.0及1.2 mg/ml剂量组)高于单培养组(P<0.05);共培养组KIM-1在较高剂量下(1.2 mg/ml)明显高于单培养组(P<0.05),OPN各染毒剂量下均高于单培养组(P<0.05),Cys-c在0.8及1.0 mg/ml剂量下均高于单培养组(P<0.05),CLU在各剂量组均明显高于单培养组(P<0.05)。在单培养条件下，HFF-1细胞上清中HGF水平明显高于HK-2细胞(P<0.05)。HGF在共培养HFF-1细胞上清组和HK-2细胞上清组水平均低于各自单培养组(P<0.05)，单培养组和共培养组的HFF-1细胞上清水平均高于HK-2细胞组(P<0.05)。结论 BTX混合物对HK-2的联合作用具有明显剂量依赖性:低剂量以拮抗为主，高剂量趋于相加。与单培养相比，HK-2/HFF-1共培养对炎症与肾损伤信号更为敏感，可作为体外肾毒性研究的可行模型。

淀粉样前体蛋白胞内结构域通过NOX2诱导神经细胞铁死亡的研究

目的 探讨淀粉样前体蛋白(amyloid precursor protein,APP)胞内结构域(APP intracellular domain,AICD)对人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)的神经毒性作用及机制。方法 建立人SH-SY5Y细胞AICD过表达模型(AICD+/+SH-SY5Y组)，APP敲低模型(APP-/-SH-SY5Y组)，正常培养SH-SY5Y细胞为对照组(NC-SH-SY5Y组)。酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组淀粉样蛋白(Aβ)，磷酸化Tau蛋白(ρ-Tau)含量;转录组测序筛选差异基因; Western blot检测AICD、APP、P16、P21、NOX2和XCT表达水平; qRT-PCR检测P16、P21、IL-1β、IL-6和TNF-α表达水平;半乳糖苷酶(β-gal)染色检测细胞衰老情况;流式细胞术检测AICD过表达对神经细胞发生脂质过氧化及铁死亡的影响。结果 与正常对照组相比，APP-/-组细胞会导致Aβ和ρ-Tau含量明显减少(P<0.05)，而AICD+/+组细胞Aβ和ρ-Tau含量差异无统计学意义(P>0.05)。AICD+/+组细胞衰老相关因子(P16,P21)、炎症因子(IL-1β,TNF-α)表达明显高于对照组(P<0.05); AICD+/+组细胞β-gal染色加深;铁死亡相关蛋白(NOX2)表达明显高于对照组(P<0.05)，诱导细胞发生铁死亡，铁死亡指标脂质过氧化水平增加;经铁死亡抑制剂(Fer-1)处理后，AICD+/+组细胞死亡率降低(F=70.75,P<0.05)，脂质过氧化物水平降低(F=30.06,P<0.05),NOX2表达降低(F=282.4,P<0.05)。结论 AICD可能通过上调铁死亡相关基因NOX2表达，诱导神经细胞发生铁死亡，促使神经细胞的衰老和炎症发生，进而发挥神经毒性作用。

阻燃剂六氟环三磷腈对人卵巢颗粒细胞活性和性腺类固醇激素生成干扰的研究

目的 探讨阻燃剂六氟环三磷腈(HFCTP)对人卵巢颗粒细胞KGN细胞活性，以及对细胞生成性腺类固醇激素干扰效应的研究，并探讨相关分子作用机制。方法 采用CCK-8的方法检测染毒剂量0.78、1.56、3.12、6.25、12.5、25、50和100μmol/L的HFCTP对KGN细胞活性的影响;开展未改变细胞活性剂量下KGN细胞培养液中雌二醇和睾酮检测工作，同时利用实时荧光定量PCR的方法检测细胞激素生成通路中相关基因表达量的变化。结果 HFCTP可明显改变KGN细胞活性的最小染毒剂量是50μmol/L;在未改变细胞活性的染毒组中，5、10和20μmol/L染毒组培养液中雌二醇的浓度与对照组相比，差异有统计学意义(F=8.068,P=0.001 7)，所有染毒组雌二醇和睾酮的浓度比值均发生了明显改变(F=5.409,P=0.008 7);基因检测的结果显示，HFCTP可通过干扰细胞醛酮还原酶1C3基因(akr1c3)影响细胞雌二醇生成，同时铁氧还蛋白1基因(fdx1)和细胞色素B5A基因(cyb5a)表达量的变化是改变细胞雌雄激素生成平衡的重要因素。结论 本研究在国内外首次开展了HFCTP对KGN细胞活性和类固醇激素生成干扰的评价，明确了CTP类物质的生殖健康风险，为开展CTP类物质的毒性评价提供了研究方法和基础数据。

探究丙戊酸钠对斑马鱼幼鱼的发育毒性

目的 探究丙戊酸钠(valproate,VPA)对斑马鱼幼鱼的神经发育毒性。方法 采用急性暴露模式，将8～108 hpf(受精后小时数)斑马鱼胚胎暴露于系列浓度VPA。于5 dpf(受精后天数)测定幼鱼光暗行为游速，确定其效应浓度与敏感窗口;在25～26 dpf进行社会偏好与镜面攻击测试;行为学分析后，取5 dpf幼鱼进行阿尔辛蓝染色，以定量软骨发育指标验证VPA发育毒性。结果 在8～108 hpf暴露期间，VPA对斑马鱼的最大无致畸效应浓度为400μmol/L，效应范围为200～400μmol/L(F=402.90,F=131.60,P<0.05)，敏感窗口为8～24 hpf(F=7.09,F=42.43,P<0.05)和72～96 hpf(F=27.48,F=26.72,P<0.05);敏感窗口暴露VPA导致幼鱼社交与运动能力减弱，并在72～96 hpf窗口特异性引起软骨发育异常，但不影响体长。结论 VPA对斑马鱼的发育毒性呈现窗口特异性，在早期神经发生期暴露特异性导致社交行为缺陷，而在颅面软骨形成关键期暴露则同时引发社交缺陷与软骨发育抑制。提示其毒性机制可能分别干扰了早期神经环路建立和神经嵴细胞介导的颅面发育过程。

TA102菌株对纳米农药阿维菌素的吸收特性研究

目的 明确鼠伤寒沙门氏菌(S. typhimurium) TA102菌株对两类纳米农药——活性成分直接纳米化的阿维菌素纳米混悬剂(Aba-NSs)和载体包覆型的阿维菌素纳米囊(Aba-NCs)的吸收特性。方法 以TA102菌株为研究对象，采用透射电子显微镜观察菌株对纳米农药的吸收情况，利用流式细胞术定量分析其摄取水平，并通过高效液相色谱法检测细菌细胞内阿维菌素的含量。结果 透射电子显微镜下观察到Aba-NSs可被细菌直接摄取;流式细胞术进一步证实Aba-NSs处理组的细菌侧向散射信号(SSC)明显增强Aba-NSs，差异有统计学意义(F=749.908,P<0.05);高效液相色谱检测结果发现，Aba-NSs与Aba-NCs处理组细菌均能检测到阿维菌素。结论 在传统Ames试验体系中，试验TA102菌株能直接摄取粒径较小的Aba-NSs，而Aba-NCs虽无法被完整摄取，但其活性成分仍能进入菌株内。从直接遗传毒性的角度分析，Ames试验对纳米农药的评价不受菌株对纳米农药吸收差异的限制。

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三聚氰胺的毒性研究

PCPA失眠大鼠模型的制作及其机制

大鼠旷场实验指标检测及参考值的探讨

目的将小动物行为学分析系统用于大鼠旷场实验,并对测定指标与传统的评判标准进行相关性分析,建立旷场实验中各指标的平均值及95%置信区间。通过对旷场实验大鼠进行筛选,减少个体差异对结果造成的影响。方法用小动物行为学分析系统测定分析3min内旷场分析箱中大鼠运动距离和中央区域运动距离,同时记录大鼠穿格数与中央区域停留时间。结果穿格数与运动距离相关性良好(r=0.959,P<0.01),中央区域停留时间与中央区域运动距离相关性良好(r=0.915,P<0.01),建立了各测定指标参考值。结论可以用测定运动距离和中央区域运动距离代替传统的穿格数和中央区域穿格数。

肝损伤动物模型研究进展

脱氧雪腐镰刀菌烯醇的毒性研究进展

大鼠急性百草枯中毒血清中细胞因子的动态变化

目的观察细胞因子TGF-β1、PDGFI、GF-1在急性百草枯中毒动物模型中的变化规律,探讨百草枯中毒致肺损伤的作用机制。方法72只Wister大鼠随机分为1个对照组和3个染毒组,分82、4、72 h 3个观察时段,观察不同剂量组在染毒后不同时间大鼠静脉血细胞因子TGF-β1、PDGFI、GF-1的动态变化,同时作病理检查。结果染毒大鼠于染毒后出现的中毒表现,8、247、2 h各剂量组所监测细胞因子的水平增加,24与72 h组与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05;P<0.01)。72 h高剂量组各指标与同时间点低剂量组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。72 h高、中、低3个剂量组与8 h时间点比较,差异有统计学意义(P<0.05)。病理检查示染毒后8 h出现肺泡毛细血管扩张、充血、中性白细胞浸润,24 h肺泡毛细血管扩张及炎性粒细胞浸润更加明显,有大量渗出液;72 h出现广泛弥漫的间质纤维化的表现。结论在百草枯中毒急性肺损伤机制中细胞因子TGF-β1、PDGFI、GF-1可能起到了重要作用。

大鼠旷场实验指标检测及参考值的探讨

目的将小动物行为学分析系统用于大鼠旷场实验,并对测定指标与传统的评判标准进行相关性分析,建立旷场实验中各指标的平均值及95%置信区间。通过对旷场实验大鼠进行筛选,减少个体差异对结果造成的影响。方法用小动物行为学分析系统测定分析3min内旷场分析箱中大鼠运动距离和中央区域运动距离,同时记录大鼠穿格数与中央区域停留时间。结果穿格数与运动距离相关性良好(r=0.959,P<0.01),中央区域停留时间与中央区域运动距离相关性良好(r=0.915,P<0.01),建立了各测定指标参考值。结论可以用测定运动距离和中央区域运动距离代替传统的穿格数和中央区域穿格数。

戊巴比妥钠与水合氯醛对大鼠麻醉效果的Meta分析

目的就戊巴比妥钠与水合氯醛对大鼠的麻醉诱导时间、麻醉持续时间和麻醉死亡率等麻醉效果进行Meta分析。方法计算机检索万方、维普、CNKI、Cochrane library和PubMed等国内外数据库中有关麻醉剂对大鼠麻醉效果比较的随机对照试验。按照一定的纳入和排除标准选取文献,采用RevMan5.3软件对文献进行统计分析。结果最终选取的9项随机对照试验,Meta分析结果显示:水合氯醛对大鼠麻醉诱导时间较戊巴比妥钠明显更短(P<0.01)、麻醉死亡率明显更低(P<0.05),水合氯醛与戊巴比妥钠对大鼠麻醉持续时间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论水合氯醛对大鼠麻醉效果较戊巴比妥钠更好。但由于部分评价指标存在异质性,且多个文献的动物样本数较少,所以需要更大样本、更高质量的研究进一步评价这两种麻醉剂对大鼠的麻醉效果。

PCPA失眠大鼠模型的制作及其机制

三聚氰胺的毒性研究

吐温80的安全性研究进展

茎环法与加PolyA尾法PCR在检测MicroRNA时引物设计的策略

<正>MicroRNA(miRNA)是一种长约18～25个核苷酸的非编码RNA,对基因的表达调控发挥着重要的作用。对于miRNA的实时定量PCR与以往的PCR有些不同,这主要是因为miRNA的自身结构比较特殊。其最大的特点就是长度过于短小,仅仅二十几个碱基的核酸片段无法直接应用常规的PCR技术扩增。所以,在针对miRNA的PCR技术中,必须要延长待测